柱壓與硅膠基質的形態(tài)(如無定形或球形硅膠)、顆粒大小、填料合成條件、裝柱條件、所用流動相和分析時的溫度有關。不同廠家的色譜柱柱壓會有所差別，相同流動相和溫度的條件下，不同廠家的新色譜柱有的柱壓可能相差4、5個MPa，特別是低端和色譜柱之間，這一區(qū)別比較明顯。這是由色譜柱廠家所選用的硅膠基質及其生產(chǎn)條件決定的，這種差異的存在是正常的。同時需要說明的一點是，柱壓與柱效有一定的關系，通常柱效高的色譜柱柱壓相對而言會高一點，但柱壓高的色譜柱并不一定就具有高柱效。

在色譜柱的使用過程中柱壓通常會出現(xiàn)兩種升高的形式：

*種是，隨著使用時間的延長色譜柱柱壓慢慢上升，這是正常的;

第二種是，使用過程中(流動相和溫度沒有改變的條件下)色譜柱壓力突然升高很多。這種壓力突然升高的現(xiàn)象，通常是由工作人員操作不當引起的，

原因：1)樣品太臟，使用前沒有過濾，導致柱篩板堵塞.

    2)樣品含有的雜質在流動相中的溶解性不是很好，與流動相混合后析出，導致柱塞板堵塞。

    3)使用緩沖鹽，處理錯誤，緩沖鹽在色譜柱中析出，堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙。

解決辦法

對于第二種，即柱壓突然升高的情況，通常有以下幾種解決辦法：

1)將色譜柱反接，用含水比例較大的流動相進行沖洗，沖洗時點。

2)色譜柱進樣一端的篩板取下，分別放在水中和甲醇中超聲或更換新的柱篩板。如果柱效沒變，但柱壓仍然較高，則應考慮進樣端填料受污染的問題，因此除了取下進樣端篩板超聲外，還需要挖掉進樣端的部分填料，挖去填料之前先檢查一下填料的顏色，如果填料的顏色發(fā)生了變化，則應該挖掉直到見到白色的填料為止。

   挖掉后色譜柱將出現(xiàn)一個缺口，填補缺口的填料可以從另一支相同品牌、相同型號的報廢色譜柱的出口端獲得，填料用有機溶劑如甲醇等調成糊狀裝入缺口處，壓緊刮平，再裝上篩板. 液相色譜系統(tǒng)中氣泡對檢測的影響及其解決方法 在我們進行液相色譜分析時，有時會遇到這樣一個問題：系統(tǒng)的流路中存在氣泡.

  由于氣泡的存在，會造成色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪聲峰，嚴重時會造成分析靈敏度下降;氣泡變大進入流路或色譜柱時會使流動相的流速變慢或不穩(wěn)定，使基線起伏. 造成上述現(xiàn)象的主要原因有三條：一是流動相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡;二是系統(tǒng)開始工作時未能將流路中的空氣驅趕干凈;三是在注入樣品時不注意混入了空氣. 為了避免這類問題的出現(xiàn)，液相色譜實際分析過程中必須重視對流動相進行脫氣處理。

柱子使用經(jīng)驗談:

色譜柱在使用前，進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是*條件)，只有這樣，測得的結果才有可比性.

1、樣品的前處理：

a、使用流動相溶解樣品。

b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質。 c、使用0.45µm的過濾膜過濾除去微粒雜質。

2、流動相的配制：

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：

a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

b、流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學反應(特殊情況除外)。

c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

d、流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

e、流動相沸點不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導致實驗無法進行。

f、在流動相配制好后，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。

3、流動相流速的選擇：

因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求*柱效，使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。 當選用*流速時，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如使用反相柱時，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。